產品貨號：AV1501-B

產品名稱：人尿源間充質干細胞擴增培養試劑盒

Human urine-derived mesenchymal stem cell expansion kit

人尿源間充質干細胞擴增培養試劑盒產品描述

該試劑盒為經過優化的低血清(2%V/V )尿源間充質干細胞( Urine-derived mesenchymal stem cell,USC)體外擴增培養基。低血清降低了胎牛血清對尿源干細胞特性和分化的不利影響,穩定性更加，適用于實驗室科研。生長因子、激素的聯合應用維持了干細胞特性及旺盛的細胞增殖能力，配合人尿源間充質干細胞分離試劑盒可在短時間內收獲大量細胞。

產品內容

使用說明

人尿源間充質干細胞擴增*培養基的配制:

將擴增培養基添加劑置于2- -8C環境中過夜解凍直至*溶解，混合均勻，與擴增基礎培養基混合配置為500mL人尿源間充質干細胞擴增*培養基

注意事項:

●配好后避光2- -8C保存，4周內使用完畢

●所有產品請于保質期內使用，超過保質期，必須放棄使用

●為確保產品質量，請避免反復凍融相關產品

1、人尿源間充質干細胞(USC)擴增與傳代:

1)細胞隔天換液，待鏡下細胞融合率達80%~90%，即可消化傳代

2)室溫0.25% EDTA-胰酶消化USC (一般不超過1min)，鏡下觀察，待細胞邊緣透亮、變圓時，加入適量USC擴增培養基終止消化，吹打混勻，重懸細胞

3) 1200rpm, 4min離心

4)棄上清, USC擴增培養基重懸細胞，按1:4比例接種至培養皿，進行后續培養

注意事項:

●USC細胞生長速率較快，待細胞融合率達80~90%或內部生長空間較小時即可進行消化傳代，因干細胞接觸抑制易影響其增殖活力。

●本培養基可體外擴增USC至10代左右，代數增加會加速細胞老化，細胞實驗盡量在P7代前進行,分化實驗盡量取代數較早細胞(P3代左右)進行。

2、USC凍存

1)配制凍存液: DMSO:血清= 200u: 800ul

2) 0.25% EDTA-胰酶消化USC 1分鐘左右，加入3- 5ml USC擴增培養基終止消化，吹打混勻細胞懸液

3) 1200rpm, 4min離心

4)棄上清,加500ul USC擴增培養基重懸

5)將1ml凍存液逐滴緩慢加入細胞懸液，混勻后轉移進冷凍管中，總體系1.5mL

6)標記名稱、代數、日期，封好封口膜，放入梯度凍存盒

7)將凍存盒放入-809C, 24小時后(第二天)轉入液氮保存

注意事項:

●慢凍速溶，凍存細胞緩慢梯度降溫，可配合使用梯度凍存盒，-809C凍存后盡早轉入液氮保存

3、USC復蘇

1) 379C水浴鍋打開備用

2)從液氮取出細胞，放入水浴鍋速溶，時間控制在1分半鐘內

3)將凍存管內液體緩慢加入5ml USC擴增培養基內,吹打混勻

4) 1200rpm, 4min離心

5)棄上清,加入適量USC擴增培養基，接種至培養皿

6)復蘇24小時后(第二天)全換液

注意事項:

●慢凍速溶，復蘇細胞水浴時間盡量控制在一-分半鐘，可晃動加速溶解

●復蘇后第二天(細胞貼壁后)盡早全換液，減少DMSO對細胞的毒性損傷

●為保證細胞活力，請避免反復凍融細胞

本尿源間充質干細胞擴增培養基已經過人尿源間充質干細胞性能測試，詳見附圖(3, 4, 5)

質量控制

√無菌檢測(細菌、真菌和支原體檢測)

√pH測試

√滲透壓檢測

√內毒素檢測

附圖3人尿源間充質干細胞體外擴增傳代圖片(光鏡: 100X )

附圖4人尿源間充質干細胞表面標記物鑒定

CD29、CD73、CD90、CD44等間充質干細胞(MSC)特異性表面標記物強陽性表達，SSEA-4多潛能干性標記物強陽性表達，造血干細胞、內皮細胞來源的標記物CD45、CD34、CD31、HLA-DR等均陰性，鑒定其為MSC來源

附圖5人尿源間充質干細胞體外定向誘導后向脂肪、成骨、軟骨細胞分化

成骨: ALP+;茜素紅+; RUNX2、OCN+

成脂:脂滴+;油紅O+

成軟骨:甲苯胺藍+; SOX9、COL II+

References

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